PCR диагностика - анализ на инфекция


Полимеразна верижна реакция (PCR) - много точен метод за молекулярна-генетична диагностика, която позволява на човек да открие различни инфекциозни и наследствени заболявания, остри и хронични етап и много преди болестта може да се прояви.

Полимеразна верижна реакция (PCR) през 1983 г., разработен Myullisa Cary (USA), за които през 1993 г. той е удостоен с Нобелова награда за химия.

PCR анализ за повечето инфекции се превърне в нещо като "златен стандарт". Повечето специалисти сблъскват с него почти всеки ден и не могат да си представят, без окончателна диагноза. PCR-често се превръща в единствения реакцията да идентифицира активните етапи на болестта в тези моменти, когато другите се провалят бактериологични, вирусологични, имунологични диагностични методи.


Предимствата на PCR диагностика в съвременната медицина:

• директното откриване на наличието на патогена (т.е. специфични области на патогенната ДНК или РНК) в пробата.
• Висока специфичност може да се определи уникален участък от ДНК, или специфична за патогена, който елиминира възможността от фалшиви реакции РНК.
• Висока чувствителност PCR позволява да се открие дори единични клетъчни патогени (вируси, бактерии). Чувствителността на PCR анализ е 10-1000 клетки в пробата (например, чувствителност имунологични и микроскопски анализи - само 103-105 клетки).

• Разработване на Universal PCR методи за откриване на различни патогени. Предмет на изследване за PCR е генетичен материал (ДНК, РНК) на паразита. Техниката може да открие множество патогени от биологична проба.
• Доста резултатите от бързия тест. Пълното изследване, проведено за 4-4.5 часа, поне - някои по-дълго.
• Възможност за идентифициране на патогени за появата на симптоми (предклинична диагностика) и след издължаване на болестта (ретроспективна диагноза). Примери предклинична диагностика ще бъдат разгледани в инкубационния период (от времето на инфекция на пациентите на жалби) и латентна инфекция (когато никакви симптоми, но има лабораторни доказателства - PCR, например). Един от акцентите е диагностичен PCR PCR в архивните материали или биологични остатъци важни за идентифициране или бащинство.

За момента PCR диагностика е значително развитие. Налице е подобряване на начина, времето и отново, има нови видове PCR, медицинската пазар навлиза в нова тестова система за тази реакция. Тази цена-PCR изучава всяка година става все по-достъпна за широк кръг от пациенти.

Какво базирани PCR

В основата на полимеразна верижна реакция се повтаря удвояване (усилване) на определени участъци от ДНК или РНК от ензими в лабораторията. Резултатът е количеството на ДНК или РНК достатъчно за визуален анализ. Проучването се копира само частта, която се вписва на посочените условия, и то само в присъствието на положението му в изследваната проба.

Например, материалът за изследване, който предвижда наличието на ДНК фрагменти или РНК патоген (слюнка, кръв, урина, освобождаване от гениталиите), поставен в специален реактор (Амплификатори). До нея се добавят специфични ензими, които се свързват патогена ДНК или РНК и синтез на копия. Този екземпляр е на няколко крачки от тип "верижна реакция", и в крайна сметка с едно копие на генетичния материал може да се получат стотици или хиляди копия. След това идва анализ и сравнение на резултатите с наличните данни за структурата на различни патогени. Използването PCR може не само да определи вида на патоген, но също така да се направи количествена резултат от анализа, т.е. като много патогени при хората.

PCR се сега разширява обхвата на възможностите за проучвания: въвеждането на мутации, сливане на ДНК фрагменти и широко в медицината, например, се установи бащинство, появата на нови гени и повече.

Какво инфекции могат да бъдат открити чрез PCR диагностика

1) HIV (може да открива човешки имунодефицитен вирус HIV-1)
2) вирусен хепатит А, В, С, G (РНК-HAV, HBV ДНК, РНК-HCV РНК-HGV)
3) инфекциозна мононуклеоза (ДНК на вируса на Епщайн-Бар -VEB)
4) Tsytomehalovyrusnaya инфекция (ДНК-CMV)

5) херпесна инфекция (херпес симплекс вирус ДНК на HSV 1 и 2)
6) ППИ (инфекции, предавани по полов път инфекции) - ureaplasmosis, gardnerellez, хламидия, микоплазмоза, трихомониаза,
7) Туберкулоза (Mycobacterium туберкулоза)
8) онкогенни вируси - вирусна инфекция (човешки папиломен вирус (включително неговите онкогенни видове 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, и 59)
9) борелиоза, пренасян от кърлежи енцефалит
10) Листериоза
11) кандидоза (гъбички от рода Candida)
12) Pylori инфекция (Helicobacter Pylori)

и други

Като се има предвид обхвата на патогени PCR диагностика се използва широко във гинекологични, урологични практика, практика, инфекциозно заболяване, в пулмологията, от туберкулоза, гастроентерология, хематология, онкология и др.

Материал за проучвания и на оградата правила

Материалът за изследване PCR, който може да открие чужда ДНК на бактерии или ДНК или РНК може да служи на различни биологични течности и екологичните права: слуз, урина, кръв, слюнка, остърган епителни клетки, тъканите на плацентата, кръв, сок простатата, околоплодна течност, плеврална течност.

Изпитът за инфекции, предавани по полов път инфекции (ППИ) сред мъжете и жените се катерят секрет от гениталния тампона или остъргване от шийката на матката, остъргване или тампон на уретрата (пикочния канал), урина.

Изпитът за инфекции (херпес инфекция, CMV, мононуклеоза, токсоплазмоза, хепатит B и C, HIV инфекция) PCR на кръв, взета.

За диагностика на инфекциозна мононуклеоза, CMV, херпес инфекция на тампона гърлото се приема за тестване за CMV - урина. Често за изследване на нервната система в редица проучвания, предприети цереброспинална течност.

В пулмология материал е храчка, плеврална течност.

Изпитът за вътрематочна инфекция - амниотична течност, плацентата тъкан.

Подготовка за депозит материал и PCR диагностика

Почти всички пациенти, които извършват PCR диагностика, да разчита на надеждни, точни и бързи резултати, които до голяма степен зависи от способността на лабораторията, професионални лабораторни лекари. Въпреки това, много от тях не мисля, че това е доверието в голяма степен зависи от нас, а именно препоръките на лекуващия лекар, начин на живот и точно събиране на материал. В събирането на материални необходимите условия, които изключват възможността от замърсяване (замърсяване) на материала и, следователно, поставя под въпрос обективността на анализа.

Правилната подготовка за доставяне на материал не представлява особена трудност. Следващите препоръки на лекарите за пациентите:

1) са били сексуално активни през деня за доставка на материала;
2) да се изследва кръвта се появява сутрин на празен стомах (не се яде, пие);
3) по време на урината, събрана в сутрешния част на първия чист стерилен контейнер.

Условия готовността PCR анализ

Крайният резултат е готов в 1,5-2h дни след доставката на материала. В някои случаи, резултатът е готов на първия ден.

Обяснение PCR

Отрицателен PCR резултат показва, че изпитваният материал в момента на доставката не е намерена никаква следа от инфекциозни агенти. Повечето случаи не показва инфекция, която се опитва да намери в пробата за изследване.

Положителен PCR точки за откриване на признаци на инфекция в изследването на биологичната проба. С голяма прецизност положителен резултат, показва наличието на инфекция в даден момент.

Има ситуации, в които PCR открити положителни за активна инфекция и не могат да говорят - така наречените "здравословни превозвач" с никакви клинични симптоми на болестта, които не се нуждаят от лечение, но изисква проследяване от лекар. Има повече в редица вирусни инфекции (HPV, CMV, EBV инфекция, херпес инфекция и т.н.) в материали като слюнка, остъргване на шийката на матката, пикочния канал, т.е. местен фокус. Но ние не можем да забравим, че предаването на медиите, достъпни за здрави хора като преход към хронична форма на заболяването с процеса на активиране. Ако PCR положителна кръв, той не е носител и изисква специфично лечение.

Количествен PCR се оценява от лекар индивидуално за конкретен инфекция отделно и не се споделя градации. Въз основа на количествен PCR лекар може да установи степента на активност на инфекцията и настроите стадия на заболяването, които със сигурност се отрази на хода и предназначени дози от лекарства.

Един от най-новите вълнуващи въпроси: как точно PCR диагностика?

За PCR анализ, има три определения:

1. Точност (с висока степен на вероятност може да се идентифицира или липса на инфекция).

2. специфичност (точността на откриване на специално инфекция).
3. чувствителност (дори при ниско съдържание на генетичния материал на патогени в пробата се открива инфекция).

Полимеразна верижна реакция на практика не дава неверни положителни (т.е. няма положителни тестове, където няма инфекция). Фалшиво отрицателни резултати са редки (често това се дължи на липсата на активна инфекция при хората в момента). Например, латентна инфекция, хронична инфекция външна дейност.